标签蛋白纯化|蛋白纯化-卡梅德生物

蔚落 2024-05-24 12:39 73阅读 0赞

标签蛋白纯化技术是一种在蛋白表达体系中引入特定标签，通过对这一标签的专一性识别，实现目标蛋白的高效、可追踪纯化的方法。

标签蛋白纯化是通过在目标蛋白中引入特定序列或结构的标签，利用这一标签与其它分离手段的相互作用，实现对目标蛋白的高效纯化的技术。这一方法广泛应用于分子生物学、生物医学研究和蛋白制备领域。

1、蛋白标签的选择

<table> 
 <tbody> 
 <tr> 
 <td style="vertical-align:top;width:142pt;"> 标签名称 </td> 
 <td style="vertical-align:top;width:142.05pt;"> 优点 </td> 
 <td style="vertical-align:top;width:142.05pt;"> 缺点 </td> 
 </tr> 
 <tr> 
 <td style="vertical-align:top;width:142pt;"> 六组氨酸标签（His-Tag） </td> 
 <td style="vertical-align:top;width:142.05pt;"> 与金属离子亲和层析结合，适用于金属螯合层析，操作简便。 </td> 
 <td style="vertical-align:top;width:142.05pt;"> 在某些情况下可能引起非特异性结合。 </td> 
 </tr> 
 <tr> 
 <td style="vertical-align:top;width:142pt;"> 谷氨酰胺标签（GST-Tag） </td> 
 <td style="vertical-align:top;width:142.05pt;"> 适用于谷氨酸亲和层析，结合力较强。 </td> 
 <td style="vertical-align:top;width:142.05pt;"> 可能对某些蛋白产生影响，不适用于某些结构敏感的蛋白。 </td> 
 </tr> 
 <tr> 
 <td style="vertical-align:top;width:142pt;"> 褐藻糖蛋白标签（Strep-Tag） </td> 
 <td style="vertical-align:top;width:142.05pt;"> 结合力较强，对目标蛋白的结构影响小。 </td> 
 <td style="vertical-align:top;width:142.05pt;"> 耗费成本较高。 </td> 
 </tr> 
 <tr> 
 <td style="vertical-align:top;width:142pt;"> 抗体标签（Flag-Tag、HA-Tag等） </td> 
 <td style="vertical-align:top;width:142.05pt;"> 适用于免疫亲和层析，对结构影响小。 </td> 
 <td style="vertical-align:top;width:142.05pt;"> 需要高质量的抗体。 </td> 
 </tr> 
 </tbody> 
</table>

2、标签蛋白纯化流程

①、设计表达载体：将选定的标签序列合并到目标蛋白的表达载体中。

②、表达宿主的选择：选择适当的表达宿主和系统，确保高效表达目标蛋白和标签蛋白。

③、蛋白表达：将构建好的载体导入宿主细胞，通过培养和诱导实现蛋白表达。

④、细胞裂解和蛋白提取：利用适当的细胞裂解方法将蛋白从细胞中提取。

⑤、亲和层析：利用选定标签的亲和性，采用相应的层析方法对蛋白进行纯化。

⑥、洗脱和纯化：利用洗脱缓冲液将目标蛋白从亲和树脂上洗脱，并经过适当的纯化步骤。

3、标签蛋白纯化注意事项

①、标签的位置：标签的选择和放置位置需根据目标蛋白的结构和性质进行合理设计。

②、标签的对目标蛋白的影响：一些标签可能会对目标蛋白的结构和功能产生影响，需要谨慎选择。

标签蛋白纯化技术是一种通过在目标蛋白中引入特定的标签，再利用对这一标签的高亲和性识别，从而实现对目标蛋白的高效纯化的方法。这种技术使得研究人员能够方便、快速地获得高纯度的蛋白，为生物学研究和生物制备提供了重要的工具。