纳米抗体的表达与纯化-卡梅德生物

系统管理员 2024-05-24 12:35 131阅读 0赞

**1.****纳米抗体介绍**

[ 纳米抗体][Link 1](nanobody, Nb)仅由两条重链构成，其重链的可变区称为[VHH][Link 1](variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody)，通过体外重组表达制备的VHH 分子质量仅仅为15kDa，是传统抗体的十分之一左右，是抗原结合片段（scFV，VH-VL）的二分之一左右。

由于没有轻链，纳米抗体仅有3个属于重链的抗原识别区域（CDRs 区）。为了弥补缺少的轻链CDRs的生物学活性，纳米抗体在 CDR3部分增加了氨基酸长度（16~18个氨基酸残基，对应的传统抗体的CDR3有8-15个氨基酸），以增加CDR的多样性和特异性。

![f8c45f509c8b4b0bad5a33d6d4543918.png][]

图1：纳米抗体的结构图（[卡梅德生物科技（天津）有限公司 ][Link 2]）

**2.纳米抗体的表达和纯化策略**

不同于经典的杂交瘤技术制备单克隆抗体，羊驼纳米抗体文库构建服务的整个流程主要包括羊驼免疫、噬菌体纳米抗体库构建、抗体筛选、表达纯化及验证等阶段。羊驼免疫后，从羊驼外周血分离B淋巴细胞，提取总RNA，反转录为cDNA，以cDNA为模板PCR扩增获得多样化的纳米抗体基因片段，然后将其连接到载体上，噬菌体纳米抗体库构建完成。随后进行多轮淘洗步骤获得抗原特异性纳米抗体，并对其进行测序、表达和验证。

![62d905dcfee44d068d35bdadff994b2c.png][]

图2：羊驼纳米抗体文库构建服务流程（[卡梅德生物科技（天津）有限公司 ][Link 2]）

卡梅德生物提供高质量的羊驼纳米抗体文库构建服务，纳米抗体制备的起始点在于羊驼免疫、骆驼免疫等驼科动物免疫，我们具备羊驼免疫服务和骆驼免疫服务，建立了完善的哺乳表达体系进行抗体表达，包括但不限于FreeStyle 293-F cell line和Expi CHO-S等细胞系，配合卡梅德设计的高表达载体（含有全长的CMV启动子以及优化后的分泌信号肽序列）进行重组抗体表达与制备。表达完成后，纳米抗体过镍柱进行纯化。再将纯化好的纳米抗体进行Biacore亲和力检测。

![37f04effec6f4030922a3b57bbf4754f.png][]

图3：Fc-VHH纳米抗体表达结果图片（[卡梅德生物科技（天津）有限公司 ][Link 1]）

**3. 纳米抗体的应用**

纳米抗体由于分子量小，是单一基因编码，容易进行基因工程改造，并且可以通过短小的连接序列聚合多个纳米抗体，形成多价或者是多特异的抗体结构。纳米抗体容易和其他结构(如BSA、IgG-Fc等)形成新的融合分子。在新的融合分子中，纳米抗体与其靶抗原定向结合，与纳米抗体融合的部分就能发挥相应的功能，因此可以与其他药物联用，或者是应用于诊断和充当多种领域的实验研究工具，应用场景广阔。纳米抗体制备技术是一种前沿的生物技术，它结合了纳米技术与抗体工程的优点，为生物医学研究和疾病治疗提供了新的途径。

**参考文献**

1.  Cortez-Retamozo V .Efficient Cancer Therapy with a Nanobody-Based Conjugate\[J\].Cancer Research, 2004, 64(8):2853-2857.DOI:10.1158/0008-5472.CAN-03-3935.
2.  Meyer T D , Muyldermans S , Depicker A .Nanobody-based products as research and diagnostic tools\[J\].Trends in Biotechnology, 2014, 32(5).DOI:10.1016/j.tibtech.2014.03.001.
3.  Steyaert J , Kobilka B K .Nanobody stabilization of G protein-coupled receptor conformational states.\[J\].Current Opinion in Structural Biology, 2011, 21(4):567-572.DOI:10.1016/j.sbi.2011.06.011.
4.  [https://www.kmdbioscience.cn/pages/yangtuoVHHkangtiwenkugoujian.html][https_www.kmdbioscience.cn_pages_yangtuoVHHkangtiwenkugoujian.html]
5.  [https://www.kmdbioscience.cn/pages/luotuomianyiVHHwenkugoujianfuwu.html][https_www.kmdbioscience.cn_pages_luotuomianyiVHHwenkugoujianfuwu.html]
6.  [https://www.kmdbioscience.cn/pages/vhhnamikangtipingtai1.html][https_www.kmdbioscience.cn_pages_vhhnamikangtipingtai1.html]

[Link 1]: https://www.kmdbioscience.cn/article/namikangtizhibeiliuchengxiangjie.html
[f8c45f509c8b4b0bad5a33d6d4543918.png]: https://image.dandelioncloud.cn/pgy_files/images/2024/05/24/401e1b79c5e4437189578f275f81d2f4.png
[Link 2]: https://www.kmdbioscience.cn/article/shenmoshinamikangti.html
[62d905dcfee44d068d35bdadff994b2c.png]: https://image.dandelioncloud.cn/pgy_files/images/2024/05/24/67b08a04b90744e78f6a00e635c7046c.png
[37f04effec6f4030922a3b57bbf4754f.png]: https://image.dandelioncloud.cn/pgy_files/images/2024/05/24/e4b88bc7c57748268e3269479b20069d.png
[https_www.kmdbioscience.cn_pages_yangtuoVHHkangtiwenkugoujian.html]: https://www.kmdbioscience.cn/pages/yangtuoVHHkangtiwenkugoujian.html
[https_www.kmdbioscience.cn_pages_luotuomianyiVHHwenkugoujianfuwu.html]: https://www.kmdbioscience.cn/pages/luotuomianyiVHHwenkugoujianfuwu.html
[https_www.kmdbioscience.cn_pages_vhhnamikangtipingtai1.html]: https://www.kmdbioscience.cn/pages/vhhnamikangtipingtai1.html