【卡梅德生物】制备鼠单抗过程中出现的问题及解决措施

川长思鸟来 2024-05-24 12:37 57阅读 0赞

1. B细胞培养在多大的孔板中培养？

在96孔板进行培养\[1\]。

2.孔板中每个孔有多少个B细胞？

根据每个细胞生长情况不同，细胞个数在几百到上千个不等。

3.动物如果对抗原产生过度免疫反应怎么办？

调整抗原的剂量和免疫频率，使用合适的免疫佐剂，并监测动物的免疫反应以确保其健康。

4.杂交瘤细胞融合效率低。

优化融合条件，考虑使用不同的杂交瘤细胞系，或尝试其他融合方法。

5.单个B细胞筛选后，抗体是如何组装的，如何设计它的重链和轻链引物？

分别从单个B细胞中扩出抗体的重轻链基因，共表达转染细胞。引物可以通过germline基因序列来设计\[2\]。

6.单克隆细胞稳定性差怎么办？

定期检测单克隆细胞的稳定性，选择稳定的单克隆细胞进行扩增和抗体生产。

7.抗体样品可能受到污染或包含杂质。

使用适当的纯化技术，例如亲和层析或凝胶过滤，以提高抗体样品的纯度。

8.B细胞大概培养多久可以用于ELISA检测，抗体量会达到多少？

B细胞培养10-12天可用于ELISA检测，抗体量在0.2 μg/mL ~ >10 μg/mL。

9.单个B细胞技术会成为治疗性抗体开发的金标准吗？

虽然单个B细胞技术逐渐成为抗体开发的主流技术之一，但是抗体开发的技术路线仍然有很多种，如杂交瘤和噬菌体展示等，这些方法各有优缺点，相互之间是互补关系\[3\]。

10.单个B细胞直接裂解后与培养后的PCR成功率哪个更高？

单个B细胞培养后的PCR成功率更高。培养后的B细胞经过扩增，细胞数增加，模板量更高。

具体技术问题可咨询[卡梅德生物][Link 1]官网获得详细内容。

参考文献

\[1\] Tan S H , Young D , Elsamanoudi S ,et al.Abstract 2565: Detection of ETV1 expression in human prostate tissue specimens using a novel and highly specific rabbit monoclonal antibody\[C\]//Proceedings: AACR Annual Meeting 2021; April 10-15, 2021 and May 17-21, 2021; Philadelphia, PA.2021.DOI:10.1158/1538-7445.AM2021-2565.

\[2\] Wallace J L , Arfors K E , Mcknight G W .A monoclonal antibody against the CD18 leukocyte adhesion molecule prevents indomethacin-induced gastric damage in the rabbit\[J\].Gastroenterology, 1991, 100(4):878-883.DOI:10.1016/0016-5085(91)90259-N.

\[3\] Powell, William C ,Hicks,et al.A new rabbit monoclonal antibody (4B5) for the immunohistochemical (IHC) determination of the HER2 status in breast cancer: comparison with CB11, fluorescence in situ hybridization (FISH), and interlaboratory reproducibility.\[J\].Appl Immunohistochem Mol Morphol, 2008,15(5):510-1. DOI:10.1097/PAI.0b013e31802ced25.

[Link 1]: https://www.kmdbioscience.cn/article/danBxibaokangtijishu.html