【卡梅德生物】单B细胞技术：如何制备兔单抗？

深藏阁楼爱情的钟 2024-05-24 12:37 80阅读 0赞

**1.兔单B细胞技术原理**

[兔单B细胞技术][B]是近年来新发展的一类快速制备[单克隆抗体][Link 1]的技术，是一种通过分离和单克隆化兔子体内的B细胞来制备单一来源的高特异性抗体的方法。基于流式细胞分选技术进行单B细胞单抗制备，利用每个B细胞只含有一个功能性重链可变区DNA序列和一个轻链可变区DNA序列且只产生一种特异性抗体的特性，从兔子的淋巴组织中收集B细胞，通过单克隆化技术从单个抗体分泌B细胞中扩增重链和轻链可变区基因，从而将收集到的B细胞扩增成单一来源的克隆群。然后选择抗体生产宿主，使其产生兔单抗的抗体。单B细胞技术具有高特异性、高活性和高亲和力等突出优势，目前，兔单B细胞技术制备的抗体在生物医学研究、诊断工具和治疗药物研发等方面有广泛应用。

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图1： 兔单克隆抗体制备流程图（[卡梅德生物科技（天津）有限公司 ][Link 2]）

**2. 兔单B细胞技术抗体制备流程**

①动物免疫、PBMC分离。选择兔子作为实验动物，并通过注射目标抗原（通常是目标蛋白或多肽）来激发免疫反应，免疫兔子4-5次，以此激活兔子的免疫系统，导致B细胞产生抗体。然后进行ELISA效价测定、免疫兔子外周血采集和PBMC分离。

②流式分选。用PBMC流式分选方法来分选抗原特异性的单个B细胞。

③单B细胞培养筛选。将分选的单个B细胞先在体外进行5~20板96孔板单B细胞培养，然后将细胞培养的上清进行ELISA筛选或者FACS等前期介入检测。

④阳性克隆测序。挑选检测的至少20个阳性细胞克隆进行RT-PCR，来扩增其抗体可变区基因，然后进行测序。

⑤载体构建、抗体表达纯化。最后进行抗体的哺乳表达载体构建、细胞转染和ELISA验证。

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图2：兔单B细胞技术抗体制备流程图（[卡梅德生物科技（天津）有限公司 ][Link 2]）

**3. 单B细胞单抗制备优势**

<table> 
 <tbody> 
 <tr> 
 <td> 类目 </td> 
 <td> 单B细胞技术 </td> 
 <td> 杂交瘤技术 </td> 
 <td> 噬菌体展示技术 </td> 
 </tr> 
 <tr> 
 <td> 抗体 </td> 
 <td> 天然 </td> 
 <td> 天然 </td> 
 <td> 非天然 </td> 
 </tr> 
 <tr> 
 <td> 抗体亲和力 </td> 
 <td> 高 </td> 
 <td> 高 </td> 
 <td> 中等 </td> 
 </tr> 
 <tr> 
 <td> 可成药性 </td> 
 <td> 高 </td> 
 <td> 高 </td> 
 <td> 低 </td> 
 </tr> 
 <tr> 
 <td> 时间 </td> 
 <td> 16～20周，可选快速免疫 </td> 
 <td> 20～26周，可选快速免疫 </td> 
 <td> 16～20周，可选快速免疫 </td> 
 </tr> 
 <tr> 
 <td> 抗体基因序列 </td> 
 <td> 直接获得 </td> 
 <td> 需要进一步测序 </td> 
 <td> 直接获得 </td> 
 </tr> 
 <tr> 
 <td> 抗体多样性 </td> 
 <td> 高 </td> 
 <td> 中等 </td> 
 <td> 中等 </td> 
 </tr> 
 <tr> 
 <td> 所能筛选的种属 </td> 
 <td> 不限种属 </td> 
 <td> 鼠、兔 </td> 
 <td> 不限种属 </td> 
 </tr> 
 </tbody> 
</table>

兔单B细胞技术能够根据B细胞的特性快速制备单克隆抗体，直接获取完整的单一来源抗体，该方法不限种属、效率高、特异性高、抗体亲和力高、可成药性高、基因多样性好且具有全天然源性，并且能够直接获得抗体基因序列。

**4. 兔单B细胞应用**

兔单B细胞技术制备的抗体通常广泛应用于以下4个方面：

①药物研发。兔单B细胞技术制备的抗体能够被用于新药物的研发，尤其是在癌症治疗领域具有极大的应用前景。

②疫苗研制。兔单B细胞技术制备的抗体能够被用于提高疫苗的效力和特异性。

③免疫疗法。使用兔单B细胞技术制备的抗体可以用于免疫治疗，能够为消费者提供更加个性化的治疗。

④基础医学研究。抗体具有特异性和多样性，能够用于解析生物学过程和疾病机制。

**5. 卡梅德生物能提供的服务及优势**

[卡梅德生物][Link 3]拥有丰富的经验积累、严格的质控体系，提供的兔单B细胞单抗制备服务的周期短、不限种属、可获得抗体序列，得到的抗体具有更高的特异性和亲和力。为了满足客户的不同需求，卡梅德生物能够提供从抗原设计，合成与修饰，到动物免疫，噬菌体文库构建与筛选，下游抗体修饰与应用鉴定等一站式技术服务。详情可咨询卡梅德生物官网获得更多知识分享：https://www.kmdbioscience.cn/pages/tudanBxibaodankangzhibeifuwu.html

**参考文献**

\[1\] Tan S H , Young D , Elsamanoudi S ,et al.Abstract 2565: Detection of ETV1 expression in human prostate tissue specimens using a novel and highly specific rabbit monoclonal antibody\[C\]//Proceedings: AACR Annual Meeting 2021; April 10-15, 2021 and May 17-21, 2021; Philadelphia, PA.2021.DOI:10.1158/1538-7445.AM2021-2565.

\[2\] Wallace J L , Arfors K E , Mcknight G W .A monoclonal antibody against the CD18 leukocyte adhesion molecule prevents indomethacin-induced gastric damage in the rabbit\[J\].Gastroenterology, 1991, 100(4):878-883.DOI:10.1016/0016-5085(91)90259-N.

\[3\] Powell, William C ,Hicks,et al.A new rabbit monoclonal antibody (4B5) for the immunohistochemical (IHC) determination of the HER2 status in breast cancer: comparison with CB11, fluorescence in situ hybridization (FISH), and interlaboratory reproducibility.\[J\].Appl Immunohistochem Mol Morphol, 2008,15(5):510-1. DOI:10.1097/PAI.0b013e31802ced25.

[B]: https://www.kmdbioscience.cn/pages/tudanBxibaodankangzhibeifuwu.html
[Link 1]: https://www.kmdbioscience.cn/pages/tudankangdingzhi.html
[29e17d1229aa4ff0b57f1bddad6b81fd.png]: https://image.dandelioncloud.cn/pgy_files/images/2024/05/24/a5466794bafd4284abee209c75f1b9fc.png
[Link 2]: https://weibo.cn/sinaurl?u=https%3A%2F%2Fwww.kmdbioscience.cn%2Fpages%2FtudanBxibaodankangzhibeifuwu.html
[1d16e62037dc400281204ae6b30bd69f.png]: https://image.dandelioncloud.cn/pgy_files/images/2024/05/24/0908cec3314441c4ad4fcbc3b9b59304.png
[Link 3]: https://www.kmdbioscience.cn/