哺乳动物表达载体有哪些类型？-卡梅德生物

喜欢ヅ旅行 2024-05-24 12:36 72阅读 0赞

以下是一些常用的哺乳动物蛋白表达载体：

1.质粒载体：

质粒载体是可以在细菌细胞内独立复制的环状DNA分子。它们被广泛用于哺乳动物细胞瞬时表达或稳定表达。质粒载体通常包含复制起始位点、多克隆位点、选择性标记和哺乳动物调控元件如启动子、多聚腺苷酸化信号和增强子其他必要元件。质粒易于操作，并且可以容纳相对较小的DNA序列整合。它们适用于哺乳动物细胞瞬时表达研究、高通量筛选和产生稳定的细胞系。

2.病毒载体：

病毒载体来源于天然存在的病毒，可以有效地将基因输送到哺乳动物细胞中。它们提供了高的转导效率，并且通常用于瞬时和稳定的基因表达。用于哺乳动物细胞蛋白表达的病毒载体的一些常见类型包括慢病毒载体、逆转录病毒载体、腺病毒载体和腺相关病毒（AAV）载体。与质粒载体相比，病毒载体提供了有效的基因递送，并且可以容纳更大的DNA序列整合。它们对于哺乳动物细胞中的长期或稳定表达特别有用，因为它们可以整合到宿主细胞基因组中（例如逆转录病毒和慢病毒载体）或保持游离型（例如AAV载体）。病毒载体具有在分裂和非分裂细胞中长期表达的优势，使其适合于基因治疗、基于细胞的治疗和长期蛋白表达。

3.杆状病毒载体：

杆状病毒载体主要用于昆虫细胞蛋白表达，例如草地贪夜蛾（Sf9）或毛滴虫（High Five）细胞。然而，它们也可以用于在一些哺乳动物细胞瞬时表达。杆状病毒载体提供有效的蛋白质生产、适当的折叠和翻译后修饰。它们对于复杂和难以表达的蛋白表达特别有用。

4.人工染色体：

人工染色体，如细菌人工染色体（BACs）或酵母人工染色体（YACs），是一种大的DNA构建体，可以携带大的能够携带大DNA插入物（100300kb），可容纳基因组片段或基因簇，包括整个基因及其调控元件，并可用于研究哺乳动物细胞中的基因调控、基因组组织和基因功能。这些载体可用于哺乳动物细胞中大基因或基因簇的稳定和表达，人工染色体可以维持天然染色质结构和调控元件，从而实现更准确的基因表达和调控。BAC载体通常含有用于细菌生长的选择性标记，并且可以在转染到哺乳动物细胞中之前使用细菌中的同源重组技术进行修饰。

5.诱导表达载体：

可诱导表达载体允许响应于特定触发或信号来控制基因表达。这些载体包含可诱导的启动子或调节元件，通常利用可被特异性诱导物（如抗生素、激素）激活或抑制的诱导型启动子（如四环素反应性启动子、雌激素反应性启动基），它们对化学物质、温度变化或特定培养条件等外部因素作出反应。可诱导表达载体提供对基因表达的时间和水平的精确控制，并可用于研究特定条件下的基因功能、途径分析或蛋白质生产。

6.表达质粒文库：

表达质粒文库是包含克隆到表达载体中的cDNA或基因组DNA片段的质粒载体的集合。这些文库使研究人员能够筛选大量基因或基因变体，用于哺乳动物细胞蛋白表达、定位或功能研究。表达质粒库可用于鉴定参与特定细胞过程、途径或疾病的基因，是高通量功能基因组学研究的宝贵工具。

7.报告基因载体：

报告基因载体被设计用于在哺乳动物细胞蛋白表达的报告基因，如荧光素酶、绿色荧光蛋白（GFP）或β半乳糖苷酶。这些载体广泛用于实时测定中监测基因表达、蛋白质定位和细胞过程。报告基因载体通常包含驱动报告基因表达的启动子，以及用于有效表达和检测报告蛋白的适当调控元件。

8.基因靶向载体：

基因靶向载体用于哺乳动物细胞中的基因编辑和基因敲除研究。这些载体通常包含位于选择性标记（例如抗生素抗性基因）和基因破坏盒（例如Cre重组酶介导的基因缺失的loxP位点）两侧的同源臂。基因靶向载体能够精确修饰哺乳动物细胞中的内源性基因，是研究基因功能和疾病机制的宝贵工具。

每种载体类型都有其优点和局限性，哺乳动物表达载体选择应根据其特定的实验要求仔细选择合适的载体，载体的选择取决于各种因素，包括基因的长度和复杂性、所需的表达持续时间、调节的需要和下游应用。

卡梅德生物可提供蛋白表达服务，具有多种蛋白表达系统及专业的一站式蛋白生产平台。

参考资料：

【1】https://kmdbioscience.biomart.cn/news/3213179.htm

【2】https://www.kmdbioscience.cn/